技術(shù)簡(jiǎn)介
CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)是蛋白質(zhì)-DNA互作關(guān)系研究的新方法,是新一代超微量ChIP-Seq技術(shù),適用于無(wú)ChIP級(jí)別抗體的蛋白研究。與傳統(tǒng)的ChIP-Seq研究方法相比,該技術(shù)無(wú)需交聯(lián)、超聲打斷、末端抹平和接頭連接等操作,因此具有省時(shí)高 效、所需的樣品量少、背景信號(hào)低和可重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),甚至可用于單細(xì)胞水平測(cè)序。CUT&Tag有望將蛋白質(zhì)-DNA互作的研究變成一種類似PCR反應(yīng)的常規(guī)操作,對(duì)基因調(diào)控、表觀遺傳等領(lǐng)域的研究具有革命性的意義。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
樣品起始量低:能夠?qū)吧倭繕悠愤M(jìn)行分析
無(wú)需ChIP級(jí)別抗體:無(wú)需提供ChIP級(jí)別抗體
性價(jià)比高:背景噪音低,所需測(cè)序深度少
實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好:實(shí)驗(yàn)重復(fù)結(jié)果一致性好
技術(shù)原理
ChiTag是Protein AG蛋白與Tn5轉(zhuǎn)座酶的融合蛋白,當(dāng)抗體結(jié)合目的蛋白(如轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白等)后,Protein AG蛋白可直接結(jié)合抗體,攜帶的Tn5轉(zhuǎn)座酶可特異性的切割目的蛋白附近的DNA pian段,并將DNA pian段連上接頭,文庫(kù)構(gòu)建之后可進(jìn)行高通量測(cè)序。
圖注: CUT&Tag實(shí)驗(yàn)流程
案例解析
CUT&Tag技術(shù)研究蛋白質(zhì)-DNA互作的優(yōu)勢(shì)
原文:CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells
期刊:Nature Communications 發(fā)表時(shí)間:20190429 影響因子: 11.878
在生物學(xué)研究中,DNA與蛋白質(zhì)之間的互作是至關(guān)重要的,參與基因的表達(dá)、調(diào)控、復(fù)制、重組和修復(fù)以及RNA的轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯和調(diào)控等多個(gè)過程,幾乎涉及所有的生命活動(dòng)。目前研究?jī)烧呋プ鞯姆椒ê芏?,作者選擇了傳統(tǒng)的研究手段ChIP-seq,優(yōu)化的CUT&RUN方法,以及新方法CUT&Tag共同研究組蛋白H3K27me3。通過比對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,發(fā)現(xiàn)CUT&Tag有*低的背景噪聲以及zui強(qiáng)的信號(hào)。通過對(duì)H3K4me1修飾物進(jìn)行分析,顯示CUT&Tag的靈敏度*高,實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性*好。
圖注. CUT&Tag方法的優(yōu)點(diǎn)
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產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 品牌 |
CUTANA™ pAG-Tn5 for CUT&Tag | 15-1017 | 50reactions | Epicypher |
Anti-Mouse Secondary Antibody for CUTANA™ CUT&Tag Workflows | 13-0048 | 250reactions | Epicypher |
Anti-Rabbit Secondary Antibody for CUTANA™ CUT&Tag Workflows | 13-0047 | 250reactions | Epicypher |
CUTANA™ Rabbit IgG CUT&RUN Negative Control Antibody | 13-0042 | 100µg | Epicypher |
Histone H3K4me3 Antibody: SNAP-ChIP® Certified, CUTANA™ CUT&RUN Compatible | 13-0041 | 100µg | Epicypher |
CUTANA™ E. coli Spike-in DNA | 18-1401 | 100ng | Epicypher |