發(fā)布時(shí)間: 2022-03-10 點(diǎn)擊次數(shù): 816次
ATCC細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)有形態(tài)計(jì)數(shù)法、MTT法和同位素法三種。MTT法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法,MTT是一種噻唑鹽,化學(xué)名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液為黃橙色。小鼠脾細(xì)胞受到ConA作用后發(fā)生增殖活化,其胞內(nèi)線粒體琥珀酸脫氫酶活性相應(yīng)升高,MTT作為其底物參與反應(yīng),形成藍(lán)色的甲臜(Formazan)顆粒沉積于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周圍,經(jīng)鹽酸─異丙醇溶解后為藍(lán)色溶液,可用酶標(biāo)測定儀測定細(xì)胞培養(yǎng)物的OD值,測定波長570nm,根據(jù)OD值的大小計(jì)算反應(yīng)體系中細(xì)胞增殖程度。
ATCC細(xì)胞觀察培養(yǎng)時(shí)的主要事項(xiàng)說明:
1.肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,再借助顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張),這樣做可方便后期的對比。
2.用75%的酒精消毒(75%的酒精的水要經(jīng)過殺菌處理)。
3.嚴(yán)格按照在無菌環(huán)境下操作的原則,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(要換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。