抗體作為嬌氣的蛋白質(zhì),它的保存有很多需要注意的地方。如果保存得當,大多數(shù)抗體的活性均可保持數(shù)月甚至數(shù)年。
1.一般保存方法
收到抗體后需要進行如下步驟操作:
離心并分裝:收到抗體后首先進行離心操作使附著在管壁和蓋子上的抗體合并到管底,避免造成損失;離心后進行分裝保存,建議分裝量以一次抗體使用量為準(不低于10ul),抗體反復凍融會是蛋白變性,降低與目標蛋白的結合率,同時也可以盡可能的降低污染的產(chǎn)生;
抗體保存:抗體通常保存溫度為-20℃,但由于抗體存在形式不同,儲存條件會有區(qū)別,具體儲存方式要以產(chǎn)品說明書為準。?
2.偶聯(lián)抗體的保存
偶聯(lián)抗體包括:酶標抗體、熒光標記、生物素標記,帶有標記物的抗體儲存條件會有不同,但以上偶聯(lián)抗體均要避光保存,光照會影響偶聯(lián)抗體的活性,需要保存在深色瓶內(nèi),或者包裹上鋁箔。熒光偶聯(lián)抗體特別容易受到光淬滅的影響,因此在整個實驗過程中均應避光操作。
3.儲存液
甘油:甘油作為常規(guī)的抗凍保護劑,為減少凍融損失也會在抗體中添加甘油使抗體終濃度為50%。?
4.抗體濃度
一般建議抗體保存濃度為≥1mg/mL,因為蛋白如果在較低濃度下進行保存易降解,所以將抗體稀釋至工作液濃度在4°C下保存時,最好不要超過一天時間。?