Creative Enzymes提供高質(zhì)量的生物分析服務(wù)和合同研究,專門從事酶活性分析,滿足制藥、生物技術(shù)和診斷行業(yè)客戶的需求。多年來,Creative Enzymes一直是熒光酶檢測領(lǐng)域經(jīng)驗(yàn)豐富的公司。我們的測量能力廣泛,涵蓋各種酶,包括氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、裂解酶、異構(gòu)酶和連接酶。在解決具體問題、優(yōu)化操作以及酶活性測量方法開發(fā)的過程中,我們始終與客戶密切合作。
熒光是一種發(fā)射現(xiàn)象,其中吸收輻射的波長始終低于發(fā)射(熒光)波長(能量較高)。熒光酶測定利用產(chǎn)物底物熒光光譜的差異來測量酶反應(yīng)(圖 1)。吸收光后,基態(tài) (S 0 ) 的熒光團(tuán)被激發(fā)到更高能量的單線態(tài)水平。在皮秒時(shí)間尺度內(nèi)發(fā)生的快速熱化使受激分子處于第一激發(fā)態(tài) (S 1 )的很低振動(dòng)能級。在系統(tǒng)發(fā)射光子后衰減回到基態(tài)之前,這種激發(fā)單線態(tài)可以保持很短的時(shí)間(納秒量級)。由于這種激發(fā)到基態(tài)躍遷的能量通常比激發(fā)過程的能量低,因此發(fā)射的波長通常比激發(fā)的波長更長。這種波長差異稱為斯托克斯位移。實(shí)際上,所有熒光數(shù)據(jù)都可以通過五個(gè)參數(shù)之一來描述:激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率、熒光壽命以及發(fā)射的各向異性或偏振。
圖 1: Perrin-Jablonski 圖。S 0是基態(tài),而S 1和S 2是電子激發(fā)態(tài)。
參考文獻(xiàn): Eccleston JF,Hutchinson JP,Jameson D M。藥物化學(xué)進(jìn)展,2005,43:19-48。
熒光測定廣泛用于確定酶反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)機(jī)制,也用于配置高通量篩選的動(dòng)力學(xué)測定。要使用基于熒光的測定進(jìn)行測量,反應(yīng)需要從非熒光底物形成熒光產(chǎn)物,反之亦然。第一種情況的一個(gè)例子是在水解酶測定中使用非熒光試鹵靈丁酯作為底物,其中酯鍵的酶裂解產(chǎn)生高熒光試鹵靈。后者的一個(gè)例子是涉及將 NAD(P)H 氧化為非熒光 NAD(P) +的任何酶反應(yīng)。熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET) 也可用于酶測定,其中酶促反應(yīng)改變底物中兩個(gè)熒光團(tuán)的距離或方向,從而改變觀察到的供體或受體的熒光強(qiáng)度。
熒光酶測定通常比分光光度測定靈敏得多,但可能會(huì)受到雜質(zhì)造成的干擾以及許多熒光化合物在光照下的不穩(wěn)定性。在當(dāng)前階段,對通??蓮娜祟惢颊攉@得的組織、細(xì)胞或液體的小樣本進(jìn)行診斷酶評估的數(shù)量不斷增加,這些測定的高靈敏度特別有價(jià)值。熒光測定還特別適合反應(yīng)混合物的小型化。通過這種方式,可以進(jìn)一步大幅提高靈敏度,從而減少對酶和熒光底物樣品的需求。隨著非常昂貴或稀缺的熒光底物的出現(xiàn),后者的保護(hù)變得重要。
憑借最新的知識(shí)和先進(jìn)的儀器,Creative Enzymes有信心為客戶提供可靠的熒光酶檢測,提供所有類型酶活性水平的量化。通過不斷追求好的服務(wù),Creative Enzymes贏得了數(shù)以萬計(jì)客戶的信任。總體而言,Creative Enzymes致力于實(shí)現(xiàn)最高的客戶滿意度,并不斷改進(jìn)服務(wù)和質(zhì)量管理。
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