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如何檢測(cè)ATCC細(xì)胞增殖情況呢?

發(fā)布時(shí)間: 2021-06-10  點(diǎn)擊次數(shù): 933次
   直接計(jì)數(shù)法是簡(jiǎn)單的檢測(cè)ATCC細(xì)胞生長(zhǎng)的方法。計(jì)數(shù)細(xì)胞一般利用臺(tái)盼藍(lán)(臺(tái)盼藍(lán)不能透過(guò)活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不著色。而死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增高,可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色)。因此,鏡下未染色細(xì)胞認(rèn)為是活細(xì)胞,而染色細(xì)胞認(rèn)為是死亡細(xì)胞。
  檢測(cè)DNA合成法是目前檢測(cè)ATCC細(xì)胞增殖準(zhǔn)確可靠的方法,常用的方法有:
  1.3H-胸腺嘧啶核苷滲入法(3H-TdR)
  胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA合成的前體物,處于S期的細(xì)胞不斷地?cái)z取TdR用以合成DNA。3H-TdR摻入法是將被放射性標(biāo)記的3H-TdR摻入DNA合成期的細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)3H-TdR摻入量的多少可客觀反映細(xì)胞復(fù)制DNA能力的大小,從而問(wèn)接了解細(xì)胞增殖情況。通過(guò)檢測(cè)H放射活性即可反映DNA含量。
  2.BrdU檢測(cè)法
  BrdU中文全名為5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)摻入,而后利用抗BrdU的抗體耦聯(lián)不同的酶,加入不同發(fā)光特性的底物,然后再通過(guò)比色法、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)或熒光信號(hào)檢測(cè)底物強(qiáng)度等步驟,反映BrdU的摻入量。該方法不需要再和放射性物質(zhì)打交道。
  3.EdU檢測(cè)法
  BrdU雖然解決了接觸同位素的問(wèn)題,但該方法需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合,但這就破壞了DNA雙鏈結(jié)構(gòu),對(duì)某些后續(xù)或同時(shí)進(jìn)行的試驗(yàn),如其他染料的結(jié)合染色有影響?,F(xiàn)在有一種新的檢測(cè)方法能避免這種情況的發(fā)生-EdU檢測(cè)。EdU(5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類似物,但其連有的炔羥基團(tuán)在天然化合物中很少見(jiàn),在細(xì)胞增殖時(shí)能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以進(jìn)行高效快速的細(xì)胞增殖檢測(cè)分析,可以有效地檢測(cè)處于S期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法相比,更簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確。

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