EDTA是一種常用的螯合劑,可以與金屬離子結合形成穩(wěn)定的絡合物。在細胞分離中,EDTA常常被用來去除細胞表面的蛋白質和多糖等物質,從而使得細胞更容易被分離出來。本文將介紹EDTA是怎樣分離
ATCC細胞的。
ATCC細胞是指由ATCC提供的已經(jīng)經(jīng)過鑒定和保種的細胞株,廣泛應用于生物學、醫(yī)學等領域的研究和實驗中。在使用ATCC細胞進行實驗時,通常需要將細胞從培養(yǎng)基中分離出來。由于細胞表面存在許多蛋白質和多糖等物質,這些物質會與培養(yǎng)基中的其他成分相互作用,導致細胞難以被分離出來。因此,需要使用一些特殊的方法來去除這些物質,以便更好地分離細胞。
EDTA可以通過與細胞表面的鈣離子結合,形成穩(wěn)定的絡合物,從而使細胞表面的蛋白質和多糖等物質失去活性。具體來說,當EDTA與鈣離子結合后,會形成一個五元環(huán)結構的螯合物,這個螯合物可以與細胞表面的蛋白質和多糖等物質結合,從而使其失去活性。這樣就可以通過離心等方法將細胞從培養(yǎng)基中分離出來。
EDTA分離ATCC細胞的步驟:
1.將細胞培養(yǎng)在含有10%FBS的培養(yǎng)基中,直到它們達到80-90%的密度。
2.用PBS洗滌一次細胞,以去除殘留的培養(yǎng)基和其他雜質。
3.向細胞中加入1-2毫升的0.25%胰蛋白酶-EDTA混合液(每毫升含0.25克胰蛋白酶和10毫克EDTA),并在室溫下孵育5-10分鐘。
4.輕輕搖晃培養(yǎng)瓶使胰蛋白酶-EDTA混合液均勻分布到整個培養(yǎng)瓶中。
5.在顯微鏡下觀察細胞是否已經(jīng)從培養(yǎng)瓶壁上脫落下來。如果還有殘留的細胞,可以再次加入少量的胰蛋白酶-EDTA混合液并繼續(xù)孵育幾分鐘。
6.用移液器將消化后的細胞懸液轉移到離心管中,并用PBS稀釋至適當濃度。
7.在室溫下離心5分鐘,使細胞沉淀下來。然后用吸管將上清液吸出并將沉淀重新懸浮在適量的PBS中即可。